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                    分離提取胎鼠大腦皮層神經元的原代細胞培訓

                    更新時間:2021-11-26      點擊次數:1356

                    我司已成功分離并培養胎鼠大腦皮層神經元的原代細胞培養,并對細胞平臺的人員進行培訓。

                    培訓地點:會議室、細胞房

                    參與培訓人員:細胞房技術人員

                    首先在會議室先講解以下基礎操作步驟

                    (1)75% (體積分數)酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

                    (2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝大腦皮層。

                    (3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;

                    (4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。

                    (5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養箱內差速貼壁30min;

                    (6)收集上清,臺盼藍染色計數,按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養箱中培養;

                    (7)培養第二天,全換液更換為種植液2;

                    (8)培養第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;

                    (9)之后每周換液兩次。

                    之后并在細胞房代領細胞平臺所有技術人員進行實練操作。后續并將組織細胞平臺的每位技術人員將此技術熟練操作。


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